RP HPLC測定藏木香中土木香內酯和異土木香內酯含量.pdf
張秀娟+丁永輝+倪琳+楊錫
摘要：目的 建立同時測定三味甘露散中土木香內酯、異土木香內酯含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，光電二極管陣列檢測器，色譜柱為CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.4%磷酸（58∶42），流速1.0 mL/min，檢測波長225 nm，柱溫30 ℃。結果 土木香內酯在0.083～0.517 μg、異土木香內酯在0.108～0.672 μg范圍內呈良好線性關系，r=0.999 9；土木香內酯平均加樣回收率為97.95%，RSD=1.31%；異土木香內酯平均加樣回收率為97.69%，RSD=1.24%。結論 本方法操作簡便，可快速、準確地測定三味甘露散中土木香內酯和異土木香內酯的含量。
關鍵詞：三味甘露散；高效液相色譜法；土木香內酯；異土木香內酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.026
中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2014）11-0085-03
三味甘露散收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥》（第一冊），由藏木香、寒水石（水煮）、異葉青蘭組成[1]。原標準僅有鑒別及常規檢查項，為更有效地控制該藥品質量，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對處方中君藥藏木香的有效成分土木香內酯和異土木香內酯進行定量測定，現報道如下。
1 儀器與試藥
C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），光電二極管陣列檢測器；KQ-250B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；德國SartoriusR200D型分析天平（十萬分之一）；上海梅特勒AE240型分析天平（萬分之一）。
土木香內酯對照品（批號110760-201008）、異土木香內酯對照品（批號110761-200204）均購自中國食品藥品檢定研究院；三味甘露散樣品（批號090401、110301）由西藏藏醫學院藏藥有限公司提供，陰性樣品自制；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流動相：乙腈-0.4%磷酸（58∶42）；檢測波長：225 nm；柱溫30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 ?L。
2.2 對照品溶液的制備
取土木香內酯對照品、異土木香內酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成混合對照品溶液（土木香內酯0.020 68 mg/mL，異土木香內酯0.026 88 mg/mL），即得。
2.3 供試品溶液的制備
取本品約2 g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.4 陰性對照溶液的制備
按處方比例及制備工藝，配制不含藏木香的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。
2.5 空白試驗
分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 ?L，注入液相色譜儀，測定。色譜圖見圖1。
1.異土木香內酯；2.土木香內酯
2.6 線性關系考察
精密吸取混合對照品溶液4、6、8、15、20、25 ?L，注入液相色譜儀，測定含量。結果表明，土木香內酯在0.083～0.517 ?g、異土木香內酯在0.108～0.672 ?g范圍內均呈良好線性關系?；貧w方程分別為：土木香內酯C=1.389 5×10-7A+2.447 2×10-3，r=0.999 9；異土木香內酯C=1.603 6×10-7A+4.106 1×10-3，r=0.999 9。
2.7 精密度試驗
精密吸取土木香內酯、異土木香內酯混合對照品溶液10 ?L，注入高效液相色譜儀，分別進樣6次，測定峰面積，RSD分別為0.35%、0.56%，表明儀器精密度良好。
2.8 穩定性試驗
精密吸取同一供試品溶液（批號090401）10 ?L，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣，測定峰面積，RSD=0.77%，表明供試品溶液在12 h內穩定性較好。
2.9 重復性試驗
取同一批樣品（批號090401）6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，測得土木香內酯平均含量為2.02 mg/g，RSD=1.38%，異土木香內酯平均含量為2.58 mg/g，RSD=1.68%，表明該方法重復性好。
2.10 加樣回收率試驗
取已知土木香內酯、異土木香內酯含量的供試品（批號110301）6份，每份約1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，分別精密加入一定量混合對照品溶液（土木香內酯0.182 8 mg/mL、異土木香內酯0.191 4 mg/mL），按“2.3”項下方法制備并測定，結果見表1。
2.11 樣品含量測定
取2批樣品，每批做2份平行樣，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依次測定土木香內酯、異土木香內酯含量，結果見表2。
3 討論
在供試品溶液制備過程中，加甲醇25 mL，分別考察超聲處理10、30、40、60 min，所得樣品測定結果表明，超聲處理30 min提取效果最佳。
本試驗采用HPLC對處方中君藥藏木香的有效成分土木香內酯和異土木香內酯進行測定。氣相色譜法（GC）也是一種分析速度快、分離效率高的分離分析方法，在食品及土壤中農藥殘留檢測領域應用頗為廣泛[2-3]，常用于測定中藥揮發性成分[4]。有文獻報道采用GC測定土木香內酯、異土木香內酯含量[5-10]。對該制劑我們也采用GC進行含量測定，以乙酸乙酯為溶劑超聲提取，氫火焰離子化檢測器檢測，采用程序升溫，測得土木香內酯平均含量為2.06 mg/g，異土木香內酯平均含量為2.55 mg/g，與HPLC測定結果比較，含量值較低。因此，采用HPLC測定該處方中土木香內酯、異土木香內酯的含量，具有操作簡便、快速、結果準確等特點，可更有效地控制三味甘露散的質量。
參考文獻：
[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準：藏藥（第一冊）[S].1995：258.
[2] 徐芳，王建芬，魏丹丹，等.GC法在檢測農藥殘留中的研究進展[J].廣東農業科學，2010，37（12）：161-163.
[3] 陳衛明，鄧天龍，張勤，等.土壤中有機氯農藥殘留的分析技術研究進展[J].巖礦測試，2009，28（2）：151-156.
[4] 劉峰，馬久太，單娜，等.GC法同時測定冠心疏通膠囊中丁香酚、龍腦和異龍腦[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（18）：56-59.
[5] 陳曉紅，陳睿，陳元濤，等.果旭阿湯中土木香內酯和異土木香內酯的含量測定[J].醫學導報，2011，30（9）：1210-1212.
[6] 查松其其格，那松巴乙拉.GC法測定都日布勒吉烏日勒中土木香內酯和異土木香內酯的含量[J].中國民族醫藥雜志，2011，17（5）：59-62.
[7] 王燕，王蕓，孫文基.氣相色譜內標法同時測定土木香中土木香內酯、異土木香內酯的含量[J].武警醫學院學報，2010，19（7）：527-529.
[8] 王燕，張雅惠，格桑索朗，等.毛細管氣相色譜內標法同時測定藏木香中土木香內酯、異土木香內酯的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2058-2060.
[9] 童麗，熱增才旦，李文淵.GC法測定藏藥瑪努巴扎中的土木香內酯[J].中國中藥雜志，2008，33（14）：1761-1762.
[10] 李慶斌，黃英棟，唐麗麗.氣相色譜法測定冠心蘇合膠囊中土木香內酯和異土木香內酯的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（15）：101-102.
（收稿日期：2013-05-28）
（修回日期：2014-04-08；編輯：陳靜）
摘要：目的 建立同時測定三味甘露散中土木香內酯、異土木香內酯含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，光電二極管陣列檢測器，色譜柱為CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.4%磷酸（58∶42），流速1.0 mL/min，檢測波長225 nm，柱溫30 ℃。結果 土木香內酯在0.083～0.517 μg、異土木香內酯在0.108～0.672 μg范圍內呈良好線性關系，r=0.999 9；土木香內酯平均加樣回收率為97.95%，RSD=1.31%；異土木香內酯平均加樣回收率為97.69%，RSD=1.24%。結論 本方法操作簡便，可快速、準確地測定三味甘露散中土木香內酯和異土木香內酯的含量。
關鍵詞：三味甘露散；高效液相色譜法；土木香內酯；異土木香內酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.026
中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2014）11-0085-03
三味甘露散收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥》（第一冊），由藏木香、寒水石（水煮）、異葉青蘭組成[1]。原標準僅有鑒別及常規檢查項，為更有效地控制該藥品質量，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對處方中君藥藏木香的有效成分土木香內酯和異土木香內酯進行定量測定，現報道如下。
1 儀器與試藥
C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），光電二極管陣列檢測器；KQ-250B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；德國SartoriusR200D型分析天平（十萬分之一）；上海梅特勒AE240型分析天平（萬分之一）。
土木香內酯對照品（批號110760-201008）、異土木香內酯對照品（批號110761-200204）均購自中國食品藥品檢定研究院；三味甘露散樣品（批號090401、110301）由西藏藏醫學院藏藥有限公司提供，陰性樣品自制；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流動相：乙腈-0.4%磷酸（58∶42）；檢測波長：225 nm；柱溫30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 ?L。
2.2 對照品溶液的制備
取土木香內酯對照品、異土木香內酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成混合對照品溶液（土木香內酯0.020 68 mg/mL，異土木香內酯0.026 88 mg/mL），即得。
2.3 供試品溶液的制備
取本品約2 g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.4 陰性對照溶液的制備
按處方比例及制備工藝，配制不含藏木香的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。
2.5 空白試驗
分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 ?L，注入液相色譜儀，測定。色譜圖見圖1。
1.異土木香內酯；2.土木香內酯
2.6 線性關系考察
精密吸取混合對照品溶液4、6、8、15、20、25 ?L，注入液相色譜儀，測定含量。結果表明，土木香內酯在0.083～0.517 ?g、異土木香內酯在0.108～0.672 ?g范圍內均呈良好線性關系?；貧w方程分別為：土木香內酯C=1.389 5×10-7A+2.447 2×10-3，r=0.999 9；異土木香內酯C=1.603 6×10-7A+4.106 1×10-3，r=0.999 9。
2.7 精密度試驗
精密吸取土木香內酯、異土木香內酯混合對照品溶液10 ?L，注入高效液相色譜儀，分別進樣6次，測定峰面積，RSD分別為0.35%、0.56%，表明儀器精密度良好。
2.8 穩定性試驗
精密吸取同一供試品溶液（批號090401）10 ?L，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣，測定峰面積，RSD=0.77%，表明供試品溶液在12 h內穩定性較好。
2.9 重復性試驗
取同一批樣品（批號090401）6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，測得土木香內酯平均含量為2.02 mg/g，RSD=1.38%，異土木香內酯平均含量為2.58 mg/g，RSD=1.68%，表明該方法重復性好。
2.10 加樣回收率試驗
取已知土木香內酯、異土木香內酯含量的供試品（批號110301）6份，每份約1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，分別精密加入一定量混合對照品溶液（土木香內酯0.182 8 mg/mL、異土木香內酯0.191 4 mg/mL），按“2.3”項下方法制備并測定，結果見表1。
2.11 樣品含量測定
取2批樣品，每批做2份平行樣，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依次測定土木香內酯、異土木香內酯含量，結果見表2。
3 討論
在供試品溶液制備過程中，加甲醇25 mL，分別考察超聲處理10、30、40、60 min，所得樣品測定結果表明，超聲處理30 min提取效果最佳。
本試驗采用HPLC對處方中君藥藏木香的有效成分土木香內酯和異土木香內酯進行測定。氣相色譜法（GC）也是一種分析速度快、分離效率高的分離分析方法，在食品及土壤中農藥殘留檢測領域應用頗為廣泛[2-3]，常用于測定中藥揮發性成分[4]。有文獻報道采用GC測定土木香內酯、異土木香內酯含量[5-10]。對該制劑我們也采用GC進行含量測定，以乙酸乙酯為溶劑超聲提取，氫火焰離子化檢測器檢測，采用程序升溫，測得土木香內酯平均含量為2.06 mg/g，異土木香內酯平均含量為2.55 mg/g，與HPLC測定結果比較，含量值較低。因此，采用HPLC測定該處方中土木香內酯、異土木香內酯的含量，具有操作簡便、快速、結果準確等特點，可更有效地控制三味甘露散的質量。
參考文獻：
[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準：藏藥（第一冊）[S].1995：258.
[2] 徐芳，王建芬，魏丹丹，等.GC法在檢測農藥殘留中的研究進展[J].廣東農業科學，2010，37（12）：161-163.
[3] 陳衛明，鄧天龍，張勤，等.土壤中有機氯農藥殘留的分析技術研究進展[J].巖礦測試，2009，28（2）：151-156.
[4] 劉峰，馬久太，單娜，等.GC法同時測定冠心疏通膠囊中丁香酚、龍腦和異龍腦[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（18）：56-59.
[5] 陳曉紅，陳睿，陳元濤，等.果旭阿湯中土木香內酯和異土木香內酯的含量測定[J].醫學導報，2011，30（9）：1210-1212.
[6] 查松其其格，那松巴乙拉.GC法測定都日布勒吉烏日勒中土木香內酯和異土木香內酯的含量[J].中國民族醫藥雜志，2011，17（5）：59-62.
[7] 王燕，王蕓，孫文基.氣相色譜內標法同時測定土木香中土木香內酯、異土木香內酯的含量[J].武警醫學院學報，2010，19（7）：527-529.
[8] 王燕，張雅惠，格桑索朗，等.毛細管氣相色譜內標法同時測定藏木香中土木香內酯、異土木香內酯的含量[J].藥物分析雜志，2009，29（12）：2058-2060.
[9] 童麗，熱增才旦，李文淵.GC法測定藏藥瑪努巴扎中的土木香內酯[J].中國中藥雜志，2008，33（14）：1761-1762.
[10] 李慶斌，黃英棟，唐麗麗.氣相色譜法測定冠心蘇合膠囊中土木香內酯和異土木香內酯的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（15）：101-102.
（收稿日期：2013-05-28）
（修回日期：2014-04-08；編輯：陳靜）
摘要：目的 建立同時測定三味甘露散中土木香內酯、異土木香內酯含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，光電二極管陣列檢測器，色譜柱為CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.4%磷酸（58∶42），流速1.0 mL/min，檢測波長225 nm，柱溫30 ℃。結果 土木香內酯在0.083～0.517 μg、異土木香內酯在0.108～0.672 μg范圍內呈良好線性關系，r=0.999 9；土木香內酯平均加樣回收率為97.95%，RSD=1.31%；異土木香內酯平均加樣回收率為97.69%，RSD=1.24%。結論 本方法操作簡便，可快速、準確地測定三味甘露散中土木香內酯和異土木香內酯的含量。
關鍵詞：三味甘露散；高效液相色譜法；土木香內酯；異土木香內酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.11.026
中圖分類號：R284.1 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2014）11-0085-03
三味甘露散收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準·藏藥》（第一冊），由藏木香、寒水石（水煮）、異葉青蘭組成[1]。原標準僅有鑒別及常規檢查項，為更有效地控制該藥品質量，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對處方中君藥藏木香的有效成分土木香內酯和異土木香內酯進行定量測定，現報道如下。
1 儀器與試藥
C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），光電二極管陣列檢測器；KQ-250B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；德國SartoriusR200D型分析天平（十萬分之一）；上海梅特勒AE240型分析天平（萬分之一）。
土木香內酯對照品（批號110760-201008）、異土木香內酯對照品（批號110761-200204）均購自中國食品藥品檢定研究院；三味甘露散樣品（批號090401、110301）由西藏藏醫學院藏藥有限公司提供，陰性樣品自制；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：CAPCELL PAK MG C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）；流動相：乙腈-0.4%磷酸（58∶42）；檢測波長：225 nm；柱溫30 ℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 ?L。
2.2 對照品溶液的制備
取土木香內酯對照品、異土木香內酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成混合對照品溶液（土木香內酯0.020 68 mg/mL，異土木香內酯0.026 88 mg/mL），即得。
2.3 供試品溶液的制備
取本品約2 g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.4 陰性對照溶液的制備
按處方比例及制備工藝，配制不含藏木香的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。
2.5 空白試驗
分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 ?L，注入液相色譜儀，測定。色譜圖見圖1。
1.異土木香內酯；2.土木香內酯
2.6 線性關系考察
精密吸取混合對照品溶液4、6、8、15、20、25 ?L，注入液相色譜儀，測定含量。結果表明，土木香內酯在0.083～0.517 ?g、異土木香內酯在0.108～0.672 ?g范圍內均呈良好線性關系?；貧w方程分別為：土木香內酯C=1.389 5×10-7A+2.447 2×10-3，r=0.999 9；異土木香內酯C=1.603 6×10-7A+4.106 1×10-3，r=0.999 9。
2.7 精密度試驗
精密吸取土木香內酯、異土木香內酯混合對照品溶液10 ?L，注入高效液相色譜儀，分別進樣6次，測定峰面積，RSD分別為0.35%、0.56%，表明儀器精密度良好。
2.8 穩定性試驗
精密吸取同一供試品溶液（批號090401）10 ?L，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣，測定峰面積，RSD=0.77%，表明供試品溶液在12 h內穩定性較好。
2.9 重復性試驗
取同一批樣品（批號090401）6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，測得土木香內酯平均含量為2.02 mg/g，RSD=1.38%，異土木香內酯平均含量為2.58 mg/g，RSD=1.68%，表明該方法重復性好。
2.10 加樣回收率試驗
取已知土木香內酯、異土木香內酯含量的供試品（批號110301）6份，每份約1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，分別精密加入一定量混合對照品溶液（土木香內酯0.182 8 mg/mL、異土木香內酯0.191 4 mg/mL），按“2.3”項下方法制備并測定，結果見表1。
2.11 樣品含量測定
取2批樣品，每批做2份平行樣，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依次測定土木香內酯、異土木香內酯含量，結果見表2。
3 討論
在供試品溶液制備過程中，加甲醇25 mL，分別考察超聲處理10、30、40、60 min，所得樣品測定結果表明，超聲處理30 min提取效果最佳。
本試驗采用HPLC對處方中君藥藏木香的有效成分土木香內酯和異土木香內酯進行測定。氣相色譜法（GC）也是一種分析速度快、分離效率高的分離分析方法，在食品及土壤中農藥殘留檢測領域應用頗為廣泛[2-3]，常用于測定中藥揮發性成分[4]。有文獻報道采用GC測定土木香內酯、異土木香內酯含量[5-10]。對該制劑我們也采用GC進行含量測定，以乙酸乙酯為溶劑超聲提取，氫火焰離子化檢測器檢測，采用程序升溫，測得土木香內酯平均含量為2.06 mg/g，異土木香內酯平均含量為2.55 mg/g，與HPLC測定結果比較，含量值較低。因此，采用HPLC測定該處方中土木香內酯、異土木香內酯的含量，具有操作簡便、快速、結果準確等特點，可更有效地控制三味甘露散的質量。
參考文獻：
[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準：藏藥（第一冊）[S].1995：258.
[2] 徐芳，王建芬，魏丹丹，等.GC法在檢測農藥殘留中的研究進展[J].廣東農業科學，2010，37（12）：161-163.
[3] 陳衛明，鄧天龍，張勤，等.土壤中有機氯農藥殘留的分析技術研究進展[J].巖礦測試，2009，28（2）：151-156.
[4] 劉峰，馬久太，單娜，等.GC法同時測定冠心疏通膠囊中丁香酚、龍腦和異龍腦[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（18）：56-59.
[5] 陳曉紅，陳睿，陳元濤，等.果旭阿湯中土木香內酯和異土木香內酯的含量測定[J].醫學導報，2011，30（9）：1210-1212.
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（收稿日期：2013-05-28）
（修回日期：2014-04-08；編輯：陳靜）
